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#김윤아 길 다운로드

08.02.2020

또한 2012년 11월에는 한류와 음식을 하나의 쇼로 결합한 U-KISS의 엘리 김과 함께 K팝 테이스티로드의 호스트가 되기도 했다. [4] [5] 선행 연구는 순환 AMP (cAMP)-의존성 단백질 키나아제 A (PKA)의 과활성화가 세포 스트레스에 대한 민감도를 초래한다는 것을 보여주었다 (Stanhill et al., 1999) 및 NaCl (그림 2-도서 보충 1), 및 PKA 신호는 가용성에 대한 응답으로 Sir2를 부정적으로 조절하는 것으로 제안되었다 (Lin et al., 20). Sir2에 의한 PMA1의 조절에 PKA가 중요하다는 가능성을 조사하기 위해, 우리는 Sir2 발현에 영향을 미치지 않고 세포내 cAMP 수준을 증가시킨 높은 친화성 cAMP 인산화를 인코딩하는 PDE2를 삭제하였다(도 2-도 2-도 서보충 1D-H). pde2Δ 돌연변이체는 sir2Δ 돌연변이체만큼이나 NaCl에 민감하고 sir2Δ 돌연변이체만큼 높은 Pma1 mRNA 수준을 증가하였다(도 2A,B). 더욱이, 8-브로모-cAMP, 비가수분해성 cAMP 아날로그를 배양 배지에 첨가하여 PMA1 발현에 대한 SIR2 삭제의 효과를 모방하였다(도 2C). PKA가 PMA1 조절에 필수적인지 여부를 조사하기 위해 pde2Δ 돌연변이 균주에서 PKA의 촉매 하위 유닛을 코딩하는 유전자인 TPK1, TPK2 및 TPK3를 삭제했습니다. pde2Δ tpk1/2/3Δ 돌연변이 균주에서의 Pma1 mRNA 수준은 WT(그림 2D)에서와 유사했기 때문에, cAMP-PKA 신호가 PmA1 전사를 조절하는 Sir2의 능력을 제어한다는 결론을 내렸습니다. 총 세포 추출물은 TCA 방법을 사용하여 제조하였다(Keogh et al., 2006). 단백질을 8-15% SDS-PAGE 겔상에서 분리하고 폴리비닐리덴 불소(PVDF) 멤브레인(밀리포어, 빌레리카, MA)으로 옮겼다. 상기 멤브레인은 특이적 항체로 조사하였고, 면역-반응성은 강화된 화학발광 시약(Elpis Biotech, Korea)을 사용하여 검출되었다. 1차 항체는 항-Sir2(1:200, 산타 크루즈, 달라스, TX), 안티 플래그 (1:1000, 시그마, 세인트 루이스, MO), 안티 – 멕 (1:1000, 산타 크루즈), 안티 GAPDH (1:10,000, 아크리스, 독일), 안티 AcH4K16 (1:2000, 업스테이트, 레이크 플래시드, NY) 및 안티 H4 대역 밀도 추적 및 정량화는 ImageJ(국립 보건원)를 사용하여 결정하였다. PKA 의존성 Sir2 인산화에 필요한 키나아제를 식별하기 위해 NACl에 대한 저항성을 위해 BY4741 배경에서 키나아제 삭제를 수용하는 121개의 돌연변이 균주를 스크리닝했습니다. 균주는 150 μg/ml G418을 함유하는 100 μl YPD에서 처음 성장되었다(Gibco-BRL, 록빌, MD) 1 일 동안 격렬한 흔들림 (240 rpm)으로 30 °C에서 96 웰 플레이트에서 96 핀 복제기 (V&P Scientific, 샌디에고, 캘리포니아)를 사용하여 96 웰 플레이트에서 0.8 M NaCl을 포함하는 50 μl 일반 YPD 또는 YPD로 접종했습니다.

플레이트는 격렬한 흔들림(240 rpm)으로 30°C에서 배양하였고, 각 웰의 OD600은 마이크로플레이트 리더(Bio-Rad)를 사용하여 9시간 동안 1시간마다 판독하였다. 각 균주의 NaCl 저항은 일반 YPD에서 에 비해 0.8 M NaCl을 함유하는 YPD의 성장에 기초하여 계산되었다(도 3-소스 데이터 1). 스크리닝 동안 확인된 NaCl 내성 돌연변이체는 5 mM 니코틴아미드(Sigma)를 함유하는 플레이트상에서 직렬 희석을 이용한 스포팅 분석법을 사용하여 NaCl 저항성의 Sir2 의존성을 추가로 시험하였다. 워싱턴대학교 의과대학 브라이언 케네디, 이준호, 서울대학교 김천아 교수가 원고와 귀중한 댓글을 비판적으로 읽어준 것에 대해 감사드리며, 서울대학교에서 효모 삭제 도서관을 제공한 원기허에게 감사를 표한다. 실험적인 도움을 주신 이지영과 김영은님께 감사드립니다.